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植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(RuBisCO)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-4938 植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(RuBisCO)ELISA試劑盒 96T/48T
產(chǎn)品概述
本試劑盒用于體外定量檢測植物組織、細(xì)胞及相關(guān)液體樣本中核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(RuBisCO)的活性。該酶是植物光合作用Calvin循環(huán)的關(guān)鍵酶，其活性直接影響光合速率和光呼吸過程。本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，具有高靈敏度和特異性。
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法：
預(yù)包被抗RuBisCO單抗的微孔板捕獲樣本中的目標(biāo)酶
加入HRP標(biāo)記的檢測抗體形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物
經(jīng)洗滌后，加入TMB顯色底物
反應(yīng)終止后，酶標(biāo)儀在450nm波長測定吸光度(OD值)
樣品中RuBisCO濃度與OD值呈正相關(guān)
試劑盒組成
組分 規(guī)格 保存條件
預(yù)包被微孔板 12×8孔 4℃
標(biāo)準(zhǔn)品(6個濃度梯度) 0.3mL×6管 -20℃
酶標(biāo)抗體 15mL 4℃
20×洗滌緩沖液 50mL 室溫
TMB顯色液A/B 各15mL 4℃避光
終止液 15mL 室溫
樣本稀釋液 30mL 4℃
樣本處理
組織樣本
稱取0.1g組織，加入1mL提取液冰浴勻漿
10,000g 4℃離心10分鐘
取上清液立即檢測或-80℃保存(避免反復(fù)凍融)
細(xì)胞樣本
收集細(xì)胞沉淀，加入提取液裂解
10,000g 4℃離心10分鐘
取上清液檢測
血清/液體樣本
室溫靜置2小時或4℃過夜
1,000g離心20分鐘
取上清液檢測
注意事項?：
避免樣本溶血
NaN3會抑制HRP活性，禁用含疊氮鈉樣本
新鮮樣本優(yōu)先，凍存樣本避免反復(fù)凍融
操作步驟
準(zhǔn)備試劑?：所有試劑使用前平衡至室溫(20-25℃)
加樣?：
標(biāo)準(zhǔn)品孔：50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品
樣本孔：50μL待測樣本
空白孔：不加
溫育?：每孔加入100μL酶標(biāo)抗體，37℃避光反應(yīng)60分鐘
洗滌?：每孔加350μL洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復(fù)5次
顯色?：每孔加入50μL底物A和B，37℃避光反應(yīng)15分鐘
終止?：每孔加入50μL終止液
測定?：15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測定450nm OD值
結(jié)果計算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得濃度
樣本濃度=測得濃度×稀釋倍數(shù)(如有)
性能指標(biāo)
檢測范圍：18-650 U/L
靈敏度：≤5 U/L
批內(nèi)變異系數(shù)：<10%
批間變異系數(shù)：<15%
注意事項
試劑盒有效期6個月，2-8℃保存
不同批號試劑不可混用
顯色液避光保存
洗滌不凈會導(dǎo)致假陽性
終止液含腐蝕性物質(zhì)，操作時需防護(hù)
所有廢棄物按生物危害物處理
所需儀器
酶標(biāo)儀(450nm濾光片)
精密移液器(0.5-1000μL)
37℃恒溫箱
洗板機(jī)(可選)
渦旋混合器
注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實驗依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師是或品牌商。
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